步骤1. 目标基因全基因合成:
从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因,我们免费提供给客户。
根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化,密码子优化。
合成设计好的基因序列。
提供给客户:目标基因(在T载体或常规穿梭载体上)及测序报告。
价格:3.80元/碱基,如果客户直接提供构建好的质粒,则免去这部分费用.
时间:2~3周,根据基因的大小而定.详见全基因合成服务
步骤2. 目标基因亚克隆:
扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
测序验证构建质粒的准确性。提供给客户:正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
价格:免费
时间:1-2周
步骤3. E. coli表达菌株转化及筛选:
扩增并抽提构建好的表达质粒。
将表达质粒转化到高效的E.Coli表达菌株中。
至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况,并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
可提供表达菌株:DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。 |