合成原理
当前化学合成多肽的方法主要有两种,即 Fmoc 和 t Boc ;由于 Fmoc 比 tBoc 存在更多优势,所以现在较流行的是 Fmoc 法。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程,合成方向是从 C 端(羧基端)向 N 端(氨基端)进行;过去多肽合成大多是在液相中进行,现在大多采用固相合成,从而大大的降低了每步产品提纯的难度;为了防止副反应的发生,合成柱和添加的氨基酸的侧链都是预先被保护的,只有羧基端是游离的,并且在反应之前必须先用化学试剂活化它。具体合成步骤如下:
1 、去保护: Fmoc 保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂( piperidine )去除氨基的保护基团。
2 、激活和交联:下一个氨基酸的羧基被一种激活剂所激活溶解,激活的单体与游离的氨基在交联剂的作用下交联,形成肽键。
3 、循环:这两步反应反复循环直到整条肽链合成完毕。4 、洗脱和脱保护:根据肽链所含的残基不同,用不同的脱树脂溶剂从柱上洗脱下来,其保护基团被一种脱保护剂( TFA )洗脱和脱保护。
肽链的设计
简介
多肽是复杂的大分子 , 因此每条序列在物理和化学特性上都是独特的,有些多肽合成很困难 , 另有些多肽虽然合成相对容易 , 但纯化困难;*常见的问题是许多肽不溶于水溶液 , 因此在纯化中 , 这些疏水肽必须溶于非水溶剂中或特殊的缓冲液 , 而这些溶剂或缓冲液很可能不适合应用于生物实验系统 , 因此研究人员不能使用该多肽达到自己的目的 , 因此下面是对于研究人员设计多肽的一些建议。 |